آزمایش Myco Direct :
◀︎این آزمایش در بخش قارچ شناسی آزمایشگاه فجر انجام میپذیرد.

آمادگی بیمار 

  • عدم استحمام بیمار یا شستشوی محل ضایعه به مدت 7-4 روز
  • عدم استفاده از کرم یا داروهای موضعی در محل ضایعات سطحی
  • گاهی ناشتایی
  • پاک نمودن محل ضایعه از فلور نرمال

نوع نمونه و نحوه جمع آوری آن

نمونه برداری باید در زیر چراغ وود و یا نور طبیعی صورت گیرد

اکثر ضایعات حاصله در اثر انواع میکروسپوروم‌ها در زیر چراغ وود- چراغ اولترا ویوله فلورسانس زردسبز رنگ می‌دهد

 ضایعات پوستی

نمونه برداری باید در زیر چراغ وود و یا نور طبیعی صورت گیرد.

بیمار نبایستی از حدود یک هفته قبل از نمونه برداری حمام کرده یا از داروهای خوراکی یا موضعی استفاده کرده باشد

انواع روشها در نمونه گیری از پوست

استفاده از نوار چسب اسکاچ

استفاده از اسکالپل کند استریل

استفاده از برس سر

ضایعات ناخن

قبل از نمونه برداری بایستی ناخن را با الکل تمیز نموده و قسمت آزاد ناخن را بوسیله ناخن گیر کاملاً جدا کرده و دور ریخت.

قسمت سفت و صدفی ناخن و یا زوائد پنیری شکل نمونه‌های مناسبی جهت آزمایش قارچی نمی‌باشند

توسط اسکالپل استریل ، حدفاصل ناحیه سالم و آسیب دیده را تراشیده و تراشه های اولیه را دور ریخته و سپس مقداری از تراشه های گرفته شده از نزدیک بستر ناخن را جمع آوری می کنیم.

برای شفاف کردن ناخن می‌توان از پتاس 20٪ و کمی حرارت استفاده کرد

بیماری های قارچی زیرجلدی

بیماریهای این دسته شامل کروموبلاستوما یکوزیس (chromoblastomycosis)،مایستوما(mycetoma)، اسپوروتریکوزیس(Sporotrichosis) ورینوسپوریدیوزیس (Rhinosporidiosis) هستند.

نمونه جمع‌آوری شده از این ضایعات ممکن است گرانول و چرک دملهای باز، تراوشات اگزود ای ضایعات، مایع مجاری تخلیه‌ای یا دملهای سربسته ویا نسوج بدست آمده و بیوپسی باشند

بیماری های قارچی احشایی

نمونه جمع‌آوری شده از این ضایعات ممکن است چرک یا اگزودمای زخمها، مایع نخاع، خلط، خون محیطی، پونکسیون مغز استخوان و یا آبسه‌های مسدود، غدد لنفاوی و نسوج بدست آمده توسط یوپسی یا اتوپسی باشد.

در این دسته از بیماری ها آزمایش مستقیم، کشت و در بعضی موارد تلقیح به حیوان حساس یا تست سرمی از نمونه بدست آمده باید انجام داد

نحوه بررسی نمونه ها در بیماری های قارچی احشایی

۱-چرک یا اگزودا

تهیه نمونه از آبسه: آسپیراسیون / باز کردن آبسه توسط اسکالپل

آماده سازی نمونه

بررسی مستقیم بدون تغییر در نمونه و یا پس از افزودن پتاس

رنگ امیزی:گرم و اسید فست

۲-نمونه برداری از خون

۳-مایع نخاع

آماده سازی نمونه: سانتریفیوژ کردن و استفاده از رسوب

رنگ آمیزی: مرکب چین ، گرم و اسید فاست

۴-نمونه برداری از دستگاه تنفس تحتانی

قطعات بدست آمده از نسج برنش توسط برونکوسکوپی

 ۵-خلط

نمونه صبحگاهی در حالت ناشتا

 شستشوی دهان با آب یا دهان شویه رقیق بدون قرقره کردن قبل از نمونه گیری

بررسی نمونه از نظر مناسب بودن

موارد ارزش دار جداسازی عوامل قارچی از نمونه خلط

نحوه بررسی مستقیم: بررسی با آب و پتاس

رنگ آمیزی: مرکب چین، گرم و اسید فاست و رنگ آمیزی های خونی

۶-خون و پونکسیون مغز استخوان و غدد لنفاوی

رنگ آمیزی: گیسما یا رایت

کشت: در مورد مغز استخوان و غدد لنفاوی مقدار کشت در هر لوله 0.2cc و در مورد خون یا پونکسیون مغز استخوان خون‌دار 2-3cc است.

تلقیح به حیوان حساس آزمایشگاهی

۷-نمونه های بیوپسی و اتوپسی

ارسال نمونه در سرم فیزیولوژی استریل

تقسیم نمونه به قطعات کوچک با رعایت کامل شرایط ضدعفونی

تهیه گسترش به روش تماس بافت با سطح لام

کشت در محیط‌های اختصاصی به روش مالیدن و له کردن در روی سطح محیط

تلقیح به حیوان حساس آزمایشگاهی

۸-نمونه برداری از واژن

توسط دو سواپ از نواحی آلوده برداشت می کنیم

درون محیط ترانسپورت و در 4 درجه سانتی گراد به آزمایشگاه ارسال می‌گردند

یکی از سواپ‌ها را برای تهیه اسمیر و دیگری را برای کشت بکار می بریم

 ۹-نمونه برداری از سایر مایعات بدن مانند پلور، سینویال و صفاق

جمع آوری نمونه درون لوله‌های استریل محتوی هپارین

در صورتیکه مایعات بدن چرکی باشند نباید نمونه‌ها سانتریفیوژ شوند

مایعات شفاف را با دور 1200در دقیقه به مدت 10دقیقه سانتریفیوژ نموده ، رسوب را جهت آزمایش مستقیم و کشت استفاده می‌کنیم

۱۰-نمونه برداری از غشاهای مخاطی

استفاده از اسکالپل کند استریل

استفاده از سواپ مرطوب

در ضایعات مشکوک به کاندیدا آلبیکنس(candida albicans) تهیه گسترده جهت رنگ‌آمیزی ضرورت دارد و نمونه جمع‌آوری شده را بلافاصله باید کشت داد .

۱۱-نمونه برداری از گوش

نمونه‌ها توسط سواپ استریل یا رینگ مخصوص تهیه و در لوله استریل یا محیط انتقالی (ترانسپورت) نگهداری می‌شوند

استفاده از اسکالپل جهت جمع آوری پوسته

۱۲-نمونه برداری از چشم

در کراتومایکوزیس، نمونه معمولاً تراشه‌های قرنیه می‌باشد

در صورت گرفتاری ملتحمه، نمونه‌ها توسط اسپا چولای پلاتینی و یا سواپ تهیه می‌شوند

نمونه‌ها باید مستقیماً روی محیط کشت برده شده و قسمتی هم جهت اسمیر استفاده شود

۱۳-نمونه برداری از مدفوع

نمونه در ظرف استریل جمع‌آوری می‌شود

سواپ‌های رکتال درون محیط ترانسپورت ارسال می‌شوند

نمونه‌ها باید به سرعت و در 4 درجه سانتی گراد به آزمایشگاه ارسال ‌گردند

نمونه‌ها نبایستی به مدت طولانی نگهداری شوند زیرا باعث رشد مخمرها می‌شود

نمونه‌ها و محیط‌های کشت پیشنهادی جهت جداسازی عوامل قارچی
 

بیماری

نوع نمونه محیط کشت
بیماری‌های سطحی
پیتریازیس ورسیکالر تراشیدن پوست غیر ضروری
تینه‌آ نایجر تراشیدن پوست سابورودکستروز آگار + کلرامفنیکل
پیدرا بریدن مو سابورودکستروز آگار
بیماری‌های جلدی
کچلی سر بریدن و کندن مو سابورودکستروز آگار + کلرامفنیکل

DTM(DermatophyteTest Medium)

کچلی بدن تراشیدن مو و پوست
کچلی ناخن تراشیدن ناخن سابورودکستروز آگار+کلرامفنیکل
کاندیدیازیس تراشیدن پوست، ناخن و مو، مخاطات و واژینال
بیماری‌های زیر جلدی
کروموبلاستومایکوزیس کبره‌ها (پوسته‌های سخت)،اگزوداها و مواد مترشحه زخم‌ها سابورودکستروز آگار+ کلرامفنیکل
مایستوما (مادرومایکوزیس) چرک سینوسهای مترشحه، مایعات آسپیره، بیوپسی سابورودکستروز آگار

Brain-heart infusion agar

Brain-heart infusion blood agar

فائوهایفومایکوزیس خلط، BAL، مایعات بدن، چرک، خراشیدن قرنیه سابورو دکستروزآگار + کلرامفنیکل
اسپروتریکوزیس چرک زخمهای شده، آسپیره مایعات بدن، BAL
رینوسپوریدیوزیس بیوپسی بینی یا چشم، تراشیدن پوست وجود ندارد
بیماری‌های سیستمیک
کاندیدیازیس CSF، خلط،BAL، ادرار، مدفوع، خون سابورودکستروز آگار + کلرامفنیکل

Brain-heart infusion biphasic

Blood culture medium

کریپتوکوکوزیس تراشیدن زخم‌های پوستی، ادرار، مغز استخوان، خون، خلط،   CSF سابورودکستروز آگار + کلرامفنیکل

Bird (niger) seed

ژئوتریکوزیس خلط، شستشوی برونش سابورودکستروز آگار+کلرامفنیکل
بلاستومایکوزیس (آمریکای شمالی) تراشیدن لبه‌های زخم‌ها، چرک آبسه‌ها

ادرار، خلط، BAL

سابورودکستروز آگار+ کلرامفنیکل

Brain-heart infusion agar

Yeast extract phosphate medium

پاراکوکسیدیوئیدومایکوزیس تراشیدن لبه‌های زخم‌ها

تراشیدن غشاهای موکوئیدی، بیوپسی غده‌های لنفاوی، شستشوی برونش، چرک آبسه‌ها و سینوس‌ها، خلط

سابورودکستروز آگار+ کلرامفنیکل

Brain-heart infusion agar

Yeast extract phosphate medium

کوکسیدیومایکوزیس ادرار، خلط، شستشوی برونش، CSF،

تراشیدن زخم‌ها، چرک آبسه‌ها و سینوس‌ها

سابورودکستروز آگار+آنتی‌بیوتیک

Yeast extract phosphate medium

هیستوپلاسموزیس خون، مغز استخوان،  CSF

خلط، شستشوی برونش، خراشیدن زخم‌های پوست، چرک سینوس‌ها یا زخم‌ها

Yeast extract phosphate medium

Blood agar

Emmons modified sabouraud agar+blood

بیماری‌های  ناشی از قارچ‌های رشته‌ای
آسپرژیلوزیس خلط، BAL سابورودکستروز آگار+کلرامفنیکل
زایگومایکوزیس خلط، BAL، بیوپسی سابورودکستروز آگار+کلرامفنیکل
هیالوهایفومایکوزیس خلط، BAL، تراشیدن ناخن، بیوپسی، خون، مایعات بدن، تراشیدن قرنیه سابورو دکستروزآگار+کلرامفنیکل
اتومایکوزیس پوسته‌ها و شوره‌ها سابورودکستروز آگار+کلرامفنیکل
اکتینومایست‌ها
اکتینومایکوزیس چرک از سینوس‌های ترشحی، مایعات آسپیره شده، خلط، مایع نخاعی Brain-heart infusion blood agar

all anaerobic,37 0C

نوکاردیازیس چرک از سینوس‌های ترشحی، مایعات آسپیره شده، خلط، مایع نخاعی سابورودکستروز آگار

Brain-heart infusion blood agar

(نگهداری در دمای اتاق و 37 درجه)

Paraffin bait technique